| 检测类型行业检测 | 行业类型食品药品 |
| 货号thinkgene006 |
酵母双杂交技术服务
一. 酵母双杂交技术服务：
酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system，y2h）基于真核生物转录调控系统，即真核转录激活因子的组件式结构。转录因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域bd(dna-binding domain)和ad (activation domain)组成。bd结合靶基因上游的操纵子序列，ad聚集rna聚合酶ii复合物，共同作用启动转录。这两个结构域分开时各具有功能但不能激活转录，只有两者在空间上较为接近时，才能呈现完整的转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence, uas）的启动子，使下游靶基因得到转录。
康颜生物技术团队酵母双杂交技术服务技术负责人为单驰，博士期间研究方向为分子遗传学。单博士有8年实验操作经验，发表过多篇相关的sci论文。擅长植物转基因，酵母双/单杂交，免疫共沉淀，emsa，pull down，luciferase检测等一系列实验。所以我们可以为您提供前期实验原理、上下游实验指导、实验设计、实验流程、结果分析、文章指导等全方位的服务。实验全程由单博士负责及操作，切实为您提供高品质的双分子荧光互补技术服务。任何技术问题7*24h在线为您解答。
y2h 应用：
检测并验证两个已知蛋白质间的相互作用；
筛选兴趣蛋白与新的蛋白质间相互作用（即cdna文库筛选）。
酵母双杂交技术服务系统：
a. 核蛋白系统clontech gal4-based two-hybrid system：
载体：pgadt7，pgbkdt7；酵母菌株：ah109。
适用于目的蛋白为胞质蛋白及核蛋白。
b. 膜蛋白系统split ubiqutin system (mbsus)：
载体：pnxgate33-3ha，pmetycgate；酵母菌株：thy.ap4。
适用于目的蛋白为膜蛋白。
酵母双杂交技术服务服务内容：
1. 构建包含目的蛋白的质粒；
2. 重组质粒转化至酵母细胞；
3. 阳性互作克隆菌株的筛选。
提交的产品和资料：
实验流程、电泳图结果、分析结果等。
二. 酵母双杂交文库构建及筛选
康颜生物拥有多年的文库构建经验，所采用的技术以及试剂盒均为市场上质量的文库构建试剂，保证所构建的每一个文库各项指标均为市场上标准，文库构建的成功率达到98%以上。
产品质量标准：
1. 原始文库库容量大于1×107cfu；
2. 平均插入片段大于1200 bp ；
3. 克隆阳性率大于95%。
酵母双杂交技术服务技术特点与优势：
1. 采用同源重组的方法构建文库，不经过任何的内切酶切割和连接过程，确保不会出现基因被酶切切断的情况，能够保证基因的完整性以及文库构建的高效率。
2. 使用多种酶在16℃恒温的条件下直接合成cdna第二链，完全忠于样本自身的基因情况，不会人为的改变样本内的基因情况及基因大小，保证文库的质量。（如用pcr的方法合成cdna第二链，由于pcr的选择性抑制及竞争性扩增，会造成基因冗余度非常高，低丰度及长片段的基因pcr扩增不到而丢失，且产生非常多的重复序列，特别是起始的rna样本量少的情况，如5 μg rna以下就需要进行15个循环以上的pcr扩增，大大降低文库质量及文库包含的基因数量)。
3. 采用高质量的反转录酶，该酶具有更高的反转录温度（55℃反转，较高的温度可以打开rna的二级结构，可以获得更长的cdna），使得反转录效率和cdna长度更好，文库的平均插入片段在1.2kb以上。
4. 赠送3个读码框的处理，确保插入基因不受蛋白移码的影响而正确表达。
文库构建流程：
交付结果：
酵母双杂交文库可选择使用pgadt7（clonetech，推荐）和pdest22（invitrogen）载体，交付的产品如下：
产品名称
交付标准
包装形式
储存条件
酵母双杂交文库甘油菌
库容：大于1×107cfu
平均插入片段：大于1200 bp
阳性率：大于95%
1.5 ml螺旋管
-80℃
酵母双杂交文库质粒
大于200 μg
1.5 ml螺旋管
-80℃
文库构建报告
电子版
word和pdf
常温
文库构建图片
电子版
jpg格式
常温
转化到酵母细胞的文库甘油菌（可选）
100 ml库容>1×108cfu / ml
离心管
-80℃
服务周期与价格 ：
项目名称
价格（元）
周期
酵母双杂交文库构建
27000
25工作日，如需转化酵母延长15个工作日。
均一化处理
3000
酵母转化
4000
15工作日
备注：酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，使用dsn法均一化方法，构建出的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。
酵母双杂交技术服务材料要求：
客户构建指定的酵母双杂交cdna文库，由客户提供组织、细胞或总rna：
细胞样本：细胞数量大于1×107 ；
组织样本：大于2 g ；
总rna：大于200 μg 。
康颜成立于2010年，由3位归国博士领衔创办，技术员均为中科院博士毕业，拥有多年实验操作经验及课题申报、实验设计、实验操作、各类大型实验仪器使用、sci论文撰写发表经验。在国内众多技术服务公司中，我们技术团队实力强劲，服务方式新颖，无论大小实验，每个项目均由创办人（中科院博士学历，多年操作经验）独立全程负责完成。且公司依托上海各大科研平台，拥有众多贵重仪器设备使用经验及方法。立志于提供国内高品质的生物专业技术服务。
公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。公司服务内容包括常规技术服务如基因克隆，定点突变，蛋白质表达纯化及检测，细胞学相关实验等，也包括基因芯片检测平台，crispr/cas9技术服务，microrna相关服务，酵母实验服务，rna干扰技术服务，抗体制备及纯化修饰服务，课题整体外包，动物模型的建立及相关实验服务等。针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。
上海康颜生物科技有限公司
刘先生
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