甲型流感病毒核酸检测试剂盒保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
甲型流感病毒核酸检测试剂盒 产品详情
参数规格:
产品名称:甲型流感病毒核酸检测试剂盒
产品规格:50t
产品货号:fs-p9630
产品分类:荧光pcr法
产品运输:低温运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 pcr检测试剂盒 。
实验过程:
一、试剂准备
1. dna模板
2.对应目的基因的特异引物(在pcr反应中,新合成的dna是要接在一小段序列上才能继续按照模板dna复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是dna也可以是rna,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×pcr buffer
4.2mm dntpmix:含datp、dctp、dgtp、dttp各2mm
5.taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×pcr buffer 5μl
dntp mixl 4μl
引物1(10pm) 2μl
引物2(10pm) 2μl
taq酶(2u/μl) 1μl
dna模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddh2o至 50 μl
视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,pcr产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μllufang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量pcr:
实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量pcr无需内标是建立在两个基础之上的:
1)ct值的重现性pcr循环在到达ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此ct值的重现性,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的ct值是恒定的。
2)ct值与起始模板的线性关系由于ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量pcr是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量pcr是迄今为止定量最准确,重现性*定量方法,已得到的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量pcr方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化pcr产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的pcr反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在pcr产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、pcr-elisa法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的pcr-elisa法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
人ⅸ型胶原蛋白elisa检测试剂盒 ⅸ-c collagentypeⅸ 3ng/ml~96ng/ml 0.1
人adropinelisa检测试剂盒 ad adropin 12.5pg/ml~400pg/ml 1
人akt蛋白elisa检测试剂盒 akt akt 1μmol/l~32μmol/l 0.1
人ap2a2elisa检测试剂盒 ap2a2 adaptor-relatedproteincomplex2,alpha2subunit 1.5ng/ml~48ng/ml 0.1
人脂肪炎症因子elisa检测试剂盒 apelin apelin 2.5ng/ml~80ng/ml 0.1
人apelin12elisa检测试剂盒 ap12 apelin12 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
人apelin13elisa检测试剂盒 ap13 apelin13 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
人apelin36elisa检测试剂盒 ap36 apelin36 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
人argonaut-2蛋白elisa检测试剂盒 ago-2 argonaut2 6.25ng/ml~200ng/ml 1
人atp酶elisa检测试剂盒 atpase atpase 0.5u/ml~16u/ml 0.1
人atp依赖的rna解旋酶aelisa检测试剂盒 dhx9 dhx9 0.5ng/ml~16ng/ml 0.1
人b7-1elisa检测试剂盒 cd80 b7-1 50pg/ml~1600pg/ml 10
人b7同系物6elisa检测试剂盒 b7-h6 b7-h6 1ng/ml~32ng/ml 0.1
人b7同源体1elisa检测试剂盒 b7-h1 b7-h1 31.25pg/ml~1000pg/ml 1
人b7同源体2elisa检测试剂盒 b7-h2 b7-h2 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
人b7同源体3elisa检测试剂盒 b7-h3 b7-h3 1ng/ml~32ng/ml 0.1
人bcl-2相关x蛋白elisa检测试剂盒 bax bcl-2associatedxprotein 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
人bh3结构域凋亡诱导蛋白elisa检测试剂盒 bid bh3interactingdomaindeathagonist 1.5pg/ml~48pg/ml 0.1
人bmi-1基因elisa检测试剂盒 bmi-1 bcell-specificmlvinte-grationsite-1 0.25ng/ml~8ng/ml 0.1
alpha-synuclein 核突触蛋白抗体
beta-actin(loadingcontrol) β-肌动蛋白/β-actin抗体(内参抗体)
beta-amyloid1-42(ct) β淀粉样肽1-42(c端)/β-amyloid1-42(ct)抗体
betaamyloid1-16 β淀粉样肽1-16/aβ1-16抗体
betaamyloid1-28 β淀粉样肽1-28/β-amyloid1-28抗体
arip2a 激活素受体2a抗体
aquaporin5 水通道蛋白5抗体
betaamyloid1-40 β淀粉样肽(1-40)抗体
betaamyloid1-42 β淀粉样肽(1-42)抗体
apoa1 载脂蛋白a1抗体
beta-arrestin1 β-抑制蛋白1抗体
ankyrinb 锚定蛋白b抗体
atp7a 铜转运蛋白质α链抗体
amphetamine(2a3f) 单克隆/抗体
asmtl asmtl蛋白抗体
tra16 激素受体相关蛋白16抗体
甲型流感病毒核酸检测试剂盒beta-amyloid1-40(ct) β淀粉样肽1-40c端/aβ1-40c端抗体
asb13 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族13抗体
betaamyloid31-35 β淀粉样肽(31-35)/aβ31-35抗体
beta-amyloid1-40(ct) β淀粉样肽1-40(c端)抗体
betaarrestin2 β-抑制蛋白2抗体/β休止蛋白2/β-arrestin抗体
anthrax 炭疽杆菌抗体
acd 肾上腺皮质发育异常蛋白抗体
angiotensiniitype1areceptor 血管紧张素ⅱ1a型受体抗体
abi1 abi1/ssh3bp1蛋白抗体
pcr的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板dna的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现smear。
◇ anneal以及extension
合适的anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定anneal-extension温度, 进行2 step pcr。anneal-extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而extension时间太长时,会出现smear。